Procesamiento de datos incorporado del detector ultravioleta dwd - 1 (doble haz de luz de alto rendimiento y doble longitud de onda)

Rango de longitud de onda: 254 nm, 280 nm (detección simultánea), y otra selección de dos longitudes de onda entre líneas espectrales de 254 nm y 280 nm - 400 nm para la detección simultánea.

* características del instrumento dwd - 1

Determinación de la longitud de onda doble de la proteína 280 NM / 254 nm:

Las moléculas de proteínas contienen Aminoácidos aromáticos como tirosina y triptófano con dobles enlaces conjugados. Tienen la naturaleza de absorber la luz ultravioleta, cuyo pico de absorción es superior a la onda de 280 nm, y el valor de densidad óptica del pico de absorción dentro de esta longitud de onda es proporcional a su concentración, por lo que pueden servir de base para la determinación cualitativa y cuantitativa de proteínas. debido a esto, el método de absorción ultravioleta a 280 nm se utiliza generalmente para el monitoreo continuo de la concentración de proteínas en el sistema de cromatografía. Sin embargo, debido a los diferentes niveles de tirosina y triptófano de varias proteínas, para cuantificar con precisión, es necesario comparar los productos puros de las proteínas a medir como estándar, o ya se conoce su coeficiente de extinción como referencia. Además, muchas sustancias no proteicas también tienen una capacidad de absorción fija a una longitud de onda de 280 nm, lo que puede interferir. Entre ellos, los efectos de los ácidos nucleicos (purinas y pirimidinas) son más graves. La absorción a 280 nm es 10 veces más fuerte que la proteína (por gramo), pero la absorción de ácidos nucleicos a 254 nm es más fuerte, y su pico de absorción está cerca de 254 nm. El coeficiente de extinción a 254 nm del ácido nucleico es el doble que a 280 nm,

Por el contrario, las proteínas tienen un valor de absorción ultravioleta de 280 nm superior al valor de absorción de 254 nm.

Normalmente:

Relación de absorción de luz de proteínas puras: A280 / a254 "1,8

Relación de absorción de luz del ácido nucleico puro: A280 / a254 "0,5

Por lo tanto, cuando los ácidos nucleicos están presentes simultáneamente en soluciones proteicas (la mayoría de los sistemas biológicos son así), se debe determinar od254 nm al mismo tiempo que od280 nm. Luego, de acuerdo con la relación de absorción de las dos longitudes de onda, se corrige a través de una fórmula empírica para eliminar el efecto del ácido nucleico y calcular el contenido real de la proteína.

Concentración de proteínas = 1,45 × A280 - 0,74 × a254 (mg / ml)

Esta fórmula empírica se estableció a partir de datos medidos a partir de una serie de mezclas de proteínas (enelasa de levadura) y ácidos nucleicos (ácidos nucleicos de levadura) con diferentes proporciones de concentración conocidas.