ámbito de aplicación del sistema de cromatografía de separación por Cromatografía líquida de baja presión: bioquímica, química sintética, productos naturales, desarrollo de medicamentos, química alimentaria, agroquímica, cosméticos, polímeros y petroquímica y otras industrias de investigación científica y preparación. Se puede realizar la cromatografía de intercambio de iones, la cromatografía de filtración de gel de cromatografía de afinidad, la cromatografía de acción hidrofóbica y otros métodos para la separación, análisis y detección de flujo de proteínas, enzimas, ácidos nucleicos, nucleótidos, polipéptidos, (incluidos / sin aminoácidos aromáticos) y cualquier otra muestra biológica / abiótica con absorción ultravioleta. es una opción ideal para la purificación de biomoléculas. tiene las características de múltiples funciones, fácil uso y economía. Diseño pequeño para maximizar el ahorro de espacio en el almacenamiento en frío y el laboratorio.

Nota

Los requisitos de los indicadores técnicos del detector ultravioleta de doble haz de alto rendimiento en la configuración del sistema se utilizan para la detección cuantitativa de la fábrica de medicamentos en las fábricas farmacéuticas nacionales. Características de los instrumentos y equipos

Determinación de la longitud de onda doble de la proteína 280 NM / 254 nm

Las moléculas de proteínas contienen Aminoácidos aromáticos como tirosina y triptófano con dobles enlaces conjugados. Tienen la naturaleza de absorber la luz ultravioleta, cuyo pico de absorción es superior a la onda de 280 nm, y el valor de densidad óptica del pico de absorción dentro de esta longitud de onda es proporcional a su concentración, por lo que pueden servir de base para la determinación cualitativa y cuantitativa de proteínas. debido a esto, el método de absorción ultravioleta a 280 nm se utiliza generalmente para el monitoreo continuo de la concentración de proteínas en el sistema de cromatografía. Sin embargo, debido a los diferentes niveles de tirosina y triptófano de varias proteínas, para cuantificar con precisión, es necesario comparar los productos puros de las proteínas a medir como estándar, o ya se conoce su coeficiente de extinción como referencia. Además, muchas sustancias no proteicas también tienen una capacidad de absorción fija a una longitud de onda de 280 nm, lo que puede interferir. Entre ellos, los efectos de los ácidos nucleicos (purinas y pirimidinas) son más graves. La absorción a 280 nm es 10 veces más fuerte que la proteína (por gramo), pero

La absorción de ácidos nucleicos a 254 nm es más fuerte, y su pico de absorción está cerca de 254 nm. El coeficiente de extinción a 254 nm del ácido nucleico es el doble que a 280 nm, mientras que la proteína es lo contrario, la absorción ultravioleta a 280 nm es mayor que el valor de absorción a 254 nm.

Normalmente

Relación de absorción de luz de proteínas puras: A280 / a254 "1,8

Relación de absorción de luz del ácido nucleico puro: A280 / a254 "0,5

Por lo tanto, cuando los ácidos nucleicos están presentes simultáneamente en soluciones proteicas (la mayoría de los sistemas biológicos son así), se debe determinar od254 nm al mismo tiempo que od280 nm. Luego, de acuerdo con la relación de absorción de las dos longitudes de onda, se corrige a través de una fórmula empírica para eliminar el efecto del ácido nucleico y calcular el contenido real de la proteína.

Concentración de proteínas = 1,45 × A280 - 0,74 × a254 (mg / ml)

Esta fórmula empírica se estableció a partir de datos medidos a partir de una serie de mezclas de proteínas (enelasa de levadura) y ácidos nucleicos (ácidos nucleicos de levadura) con diferentes proporciones de concentración conocidas.

Configuración del sistema